目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用最多的免疫組化筆，也被稱為PapPen，DAKOPEN筆、免疫組織化學(xué)PAP筆、超級(jí)免疫組化筆、PAP筆或SuperPapPen，它是一種在醫(yī)療領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的工具。它不僅在醫(yī)院和癌癥研究機(jī)構(gòu)中被頻繁使用，還在動(dòng)物檢疫站以及高等教育機(jī)構(gòu)的病理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、化學(xué)和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中發(fā)揮著重要作用。使用這種筆的步驟包括：首先對(duì)組織切片進(jìn)行脫蠟和水化處理，隨后用紙巾輕輕擦去玻片上組織邊緣的多余液體。接下來(lái)使用免疫組化筆在玻片上的樣本周圍畫圈，然后讓其自然干燥大約10至15秒。
免疫組化筆的使用背景：
免疫組化技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于臨床病理學(xué)和科學(xué)研究中的檢測(cè)方法，它利用帶有標(biāo)記的特定抗體來(lái)識(shí)別和定位組織中的抗原，并用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的原位表達(dá)。在進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用免疫組化筆對(duì)載玻片邊緣進(jìn)行封閉是一個(gè)至關(guān)重要的步驟，這樣做有助于避免抗體的不必要擴(kuò)散和溢出，從而減少試劑的消耗，有效降低實(shí)驗(yàn)成本。然而，目前市面上的免疫組化筆在對(duì)載玻片邊緣超過2mm的區(qū)域進(jìn)行封閉時(shí)，操作起來(lái)既耗時(shí)又費(fèi)力。除此之外，這些筆還存在一些問題，如價(jià)格高、化學(xué)氣味刺激、液體石蠟的流動(dòng)性問題，以及可能導(dǎo)致組織污染的過量流出等，這些問題都可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響，顯示出這些工具在實(shí)際應(yīng)用中的局限性。近年來(lái)隨著多色熒光免疫組化、RNA原位雜交技術(shù)在臨床和基礎(chǔ)研究中的廣泛應(yīng)用，現(xiàn)有的免疫組化筆的缺點(diǎn)更為突出，嚴(yán)重阻礙新技術(shù)、新方法的開展應(yīng)用。
多重?zé)晒饷庖呓M化（mIHC）通常在一張切片上進(jìn)行6-8種抗體的免疫組化染色，需要花費(fèi)2-3天的時(shí)間進(jìn)行6-8輪的一抗和酶聯(lián)二抗孵育、TSA顯色，煮沸洗脫抗體后再進(jìn)行下一輪染色，目前的免疫組化筆都不耐熱，加熱后疏水圈都會(huì)溶解脫落，每次用含洗滌劑的緩沖液清洗會(huì)也對(duì)疏水圈有所溶解破壞，在染色過程中需要經(jīng)過數(shù)十次緩沖液清洗，需要經(jīng)常不斷地用免疫組化筆加固疏水圈，防止染色試劑的流失，不然將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。
RNA原位雜交技術(shù)可以應(yīng)用于多種類型的樣本，包括石蠟包埋樣本、冰凍樣本、貼壁細(xì)胞以及懸浮細(xì)胞樣本等。近年來(lái)，隨著轉(zhuǎn)錄組分析在癌癥研究中的廣泛應(yīng)用，RNA與蛋白質(zhì)一樣可以作為臨床診斷、治療評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè)的生物學(xué)指標(biāo)。因此，RNA原位雜交在腫瘤精準(zhǔn)診療中的應(yīng)用尤為重要，其精確檢測(cè)目標(biāo)RNA的能力對(duì)于癌癥的研究和治療具有重要意義。
RNAscope是2011年美國(guó)ACD公司基于持有專利的雙Z型探針設(shè)計(jì)的原位雜交技術(shù)，它可以在組織或細(xì)胞原位檢測(cè)單一分子RNA。這種技術(shù)通過寡核苷酸互補(bǔ)配對(duì)的信號(hào)放大系統(tǒng)，結(jié)合酶催化底物，使得在顯微鏡下可以看到熒光或可見光的信號(hào)。RNAscope不僅實(shí)現(xiàn)了單一分子RNA的原位檢測(cè)，而且可以在一張組織切片上最多標(biāo)記4個(gè)不同的RNA分子。RNAscope技術(shù)以其能放大特異性信號(hào)而非噪音信號(hào)的專利探針設(shè)計(jì)方法，顯著提高了RNA檢測(cè)的敏感性和準(zhǔn)確性。這使得RNAscope成為RNA原位雜交領(lǐng)域的金標(biāo)準(zhǔn)，并代表了該領(lǐng)域的一項(xiàng)重大進(jìn)步。RNAscope技術(shù)操作步驟多、試劑昂貴，需要經(jīng)過高溫修復(fù)組織、酶消化、三級(jí)信號(hào)放大、酶標(biāo)抗體信號(hào)放大及顯色、每個(gè)染色步驟后的多種緩沖液清洗等，對(duì)疏水圈的要求極高，免疫組化筆的應(yīng)用成了影響實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素。美國(guó)ACD公司推薦使用ImmEdge® Hydrophobic Barrier PAP Pen（H-4000），如使用其它品牌的免疫組化筆因在染色過程中疏水圈容易破壞導(dǎo)致試劑流失，最終影響到原位雜交的結(jié)果。但I(xiàn)mmEdge® Hydrophobic Barrier PAP Pen（H-4000）價(jià)格昂貴，每支價(jià)格高達(dá)1226元，嚴(yán)重阻礙了該筆的廣泛應(yīng)用。
RNA原位雜交疏水筆的創(chuàng)新點(diǎn)
目前，商業(yè)化的免疫組化筆液體配方均為國(guó)外研制，國(guó)內(nèi)主要為凡士林、石蠟等簡(jiǎn)單的混合液，或者中性樹膠、聚二甲基硅氧烷、氣相二氧化硅等疏水性材料，溶劑一般為酒精、甲苯、二甲苯、丁酮、丙酮、環(huán)己酮等有毒溶劑。此外目前商品化的免疫組化筆液貼片和疏水效果差，且價(jià)格昂貴。本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種附著力強(qiáng)、疏水性好、成本低、無(wú)苯環(huán)保的RNA原位雜交疏水筆液體及其制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：一種RNA原位雜交疏水筆液體，該液體采用無(wú)苯環(huán)保的混合溶劑，選用高分子納米材料、增稠劑、染料等主要成分。
使用RNA原位雜交疏水筆的優(yōu)勢(shì)
1、節(jié)省試劑的使用、減少實(shí)驗(yàn)的成：RNA原位雜交疏水筆可節(jié)省試劑,降低運(yùn)行RNA原位雜交、免疫組化（IHC）和多重?zé)晒饷庖呓M化（mIHC）實(shí)驗(yàn)的成本。 建立疏水屏障的目的是為了防止試劑擴(kuò)散流失、減少試劑的使用和實(shí)驗(yàn)的成本。道理很簡(jiǎn)單，使用一半的試劑量來(lái)完全覆蓋組織切片意味著可節(jié)省50%的試劑，特別是實(shí)驗(yàn)步驟繁多、試劑有昂貴的RNA原位雜交實(shí)驗(yàn)。但是沒有任何一部分的節(jié)約使你的組織受損和破壞你的實(shí)驗(yàn)值得，RNA原位雜交疏水筆消除了麻煩,使節(jié)省試劑和研究經(jīng)費(fèi)的目標(biāo)成為可能。
2、疏水性能優(yōu)異、筆膜附著力強(qiáng)：RNA原位雜交疏水筆劃圈后可在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下有效減少試劑的使用量，并避免表面試劑流失造成的干片、脫片。疏水圈可耐受各種緩沖液的浸洗和加熱修復(fù)，筆膜附著力強(qiáng)，使用數(shù)天不脫落。
3、確保實(shí)驗(yàn)的靈活性：使用RNA原位雜交疏水筆，可以在同一張玻片上分離出不同的組織切片,并用不同的試劑進(jìn)行染色。這在很多情況下都是很方便的，比如在比較不同的主抗體與相同的表位時(shí)。在可視化過程中,您不需要在幾個(gè)幻燈片之間切換,只需在2-6個(gè)組織切片間滑動(dòng)即可。因此,成像切片和比較來(lái)自每個(gè)抗體的結(jié)果更容易和更快。同樣適用于滴定實(shí)驗(yàn)。當(dāng)您不需要在多個(gè)幻燈片之間進(jìn)行切換時(shí),樣本可視化和圖像采集將會(huì)流得更快。
4、優(yōu)良的熱穩(wěn)定性：RNA原位雜交疏水筆是熱穩(wěn)定的 ，可以難受各種緩沖液煮沸或高壓修復(fù)抗原30分鐘以上，耐高溫的能力使RNA原位雜交疏水筆能適用于多種染色技術(shù)，如RNA原位雜交、免疫組化、免疫細(xì)胞化學(xué)和多重?zé)晒饷庖呓M化、免疫熒光染色等多種染色方法。特別是適用于5-8色的多重?zé)晒饷庖呓M化（mIHC）染色，5-8輪的熱修復(fù)不會(huì)影響疏水屏障的效能，一次劃圈可以將確保實(shí)驗(yàn)結(jié)束。 雜交帶來(lái)的成本削減效益與IHC和聯(lián)合國(guó)試驗(yàn)相同。然而,所選的阻隔法需要在協(xié)議中所示的雜交溫度下提供穩(wěn)定性。耐熱PAP筆也給你在進(jìn)行熱誘導(dǎo)表位檢索前應(yīng)用疏水屏障的靈活性。
5、RNA原位雜交疏水筆的環(huán)保無(wú)毒： 高分子納米材料結(jié)合無(wú)苯環(huán)保溶劑組成優(yōu)良牢固的疏水屏，RNA原位雜交疏水筆也是一個(gè)環(huán)保的選擇。它提供高質(zhì)量的結(jié)果，但不含臭氧消耗碳?xì)浠衔铮矡o(wú)苯無(wú)毒，可以放心使用，節(jié)省試劑和研究經(jīng)費(fèi)的同時(shí)也不會(huì)以犧牲環(huán)境和健康為代價(jià)。
6、染色結(jié)束后疏水圈容易清除：染色結(jié)束后可以使用任何清除試劑，如二甲苯、丙酮等都可以去除疏水圈，RNA原位雜交疏水筆筆膜也可以與中性樹膠兼容，可以直接滴加中性樹膠后加蓋蓋玻片，筆膜與中性樹膠兼容透明無(wú)痕，不影響染色結(jié)果的觀察。
7、應(yīng)用廣泛且便捷：RNA原位雜交疏水筆不僅適用于石蠟切片，還能方便地用于冰凍切片和細(xì)胞涂片。此外，它兼容RNA原位雜交、多重?zé)晒饷庖呓M化（mIHC）、多種免疫組化染色技術(shù)，包括SP、LSAB、ABC和PAP等，使得實(shí)驗(yàn)操作更加靈活。
產(chǎn)品介紹：
用于染色實(shí)驗(yàn)前對(duì)固定于載玻片的組織進(jìn)行阻水處理，可在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下有效減少試劑的使用量，并避免表面試劑流失造成的干片、脫片。
RNA原位雜交疏水筆HJ-4006
應(yīng)用范圍:
RNA原位雜交、免疫組化（IHC）和多重?zé)晒饷庖呓M化（mIHC）、免疫熒光染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。 |
